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腺病毒 慢病毒 腺相关病毒
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产品: 浏览次数:1374腺病毒 慢病毒 腺相关病毒 
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最后更新: 2013-03-27 14:39
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详细信息

重组腺病毒包装技术服务      
简介
腺病毒载体是目前基因治疗中应用最广泛的一种病毒载体。与其他病毒载体相比,腺病毒载体作为基因转移工具具有许多独特的优点: ①腺病毒粒子相对稳定,病毒基因组重排频率低,插入外源基因的病毒基因组在连续传代中保持不变,易于用重组DNA技术操作;②安全性较好,腺病毒无需整合进宿主细胞基因组中,目的基因在宿主细胞基因组外游离状态下表达,整合突变致癌可能性小,基因毒性低;③腺病毒基因组较大(36 kb) ,绝大多数基因组(约35kb)均能被外源基因取代,插入大片段外源性基因的潜力大;④有较大的宿主范围,可感染分裂细胞和非分裂细胞,转导细胞种类多,对于受体细胞是否处于分裂期要求不严格;⑤腺病毒载体容易将外源基因直接转移到靶细胞中,并有效表达成活性蛋白;⑥外源基因表达水平较高。
佰而林使用的重组腺病毒载体为人腺病毒2型和5型,由于缺失了基因组E1和E3区,所以是复制缺陷型重组腺病毒载体,使用上更为安全。
服务介绍
佰而林组建了专业的技术团队开展重组腺病毒相关技术服务,该团队具有多年的工作经验,已成功构建了数百个表达不同基因的重组腺病毒载体,广泛应用于传染性疾病、癌症、心血管疾病、单基因疾病等的基因治疗和基础研究中。
佰而林腺病毒基因操作技术平台,提供Ad2和Ad5两种血清型重组腺病毒载体构建、扩增、纯化以及相应的技术咨询服务,如腺病毒载体的细胞感染方法,腺病毒载体相关的动物实验操作等。
佰而林使用的重组腺病毒系统,除了克隆阳性率高、包装稳定、出毒迅速、滴度高外,最大特点在于加入了调控基因,可以根据实验需要人为调控目的基因的表达程度,另一方面,佰而林使用的重组腺病毒系统,几乎可以在腺病毒容量内转入任何目的基因,具有同类产品不可比拟的优势。
1、            腺病毒穿梭载体的构建
客户提供含有目的基因的原始质粒,佰而林将该目的基因克隆至穿梭载体;
2、            腺病毒载体的同源重组
利用重组技术将目的基因的表达框从穿梭载体转移到腺病毒载体,由于腺病毒骨架质粒与穿梭质粒分别有两段序列相同的同源臂,同源重组后,挑取重组子进行酶切鉴定,挑选酶切鉴定正确的克隆,进行下一步腺病毒载体的包装。
3、            腺病毒载体的包装与扩增
将筛选到的重组腺病毒载体运用脂质体法转染到293细胞中进行包装,将包装好的病毒超速离心收集,经过纯化后提供给客户至少达到1×1012vp以上的病毒量,可直接用于干细胞和动物实验(根据客户需要,不同量有价格差异)。
客户须知
针对所要构建重组腺病毒的目的基因,客户需协助提供以下信息:
1、            插入目的基因序列信息,原始载体序列信息,载体图谱,酶切分析图等;
2、            原始质粒的鉴定信息,包括PCR鉴定资料、酶切鉴定报告、测序报告等;
3、            目的基因有无细胞毒性,是否需要构建对照病毒,后续是用于细胞实验还是动物实验,需要感染的细胞类型或动物模型类型等。
常见问题
1、            佰而林使用的腺病毒系统,有什么特色?
佰而林使用的重组腺病毒系统,除了克隆阳性率高、包装稳定、出毒迅速、滴度高外,最大特点在于加入了调控基因,可以根据实验需要人为调控目的基因的表达程度,另一方面,佰而林使用的重组腺病毒系统,几乎可以在腺病毒容量内转入任何目的基因,具有同类产品不可比拟的优势。
2、            佰而林提供腺病毒包装的服务形式有哪些?

1)客户提供目的基因或含目的基因的质粒及其序列,佰而林将该目的基因克隆至穿梭载体,通过同源重组构建好腺病毒载体,并包装、生产、纯化;
2)佰而林提供穿梭质粒,客户将目的基因构建至穿梭载体,再由佰而林构建腺病毒载体并包装、生产、纯化;
3)佰而林提供的标准病毒量为1×10^12vp,如果客户后续试验需要,佰而林将提供继续生产纯化的服务;
4)佰而林亦可根据客户要求提供不经纯化的病毒。
3、            佰而林提供的腺病毒包装服务周期如何?
1)            如果客户提供目的基因,佰而林完成穿梭质粒及腺病毒载体构建、生产整个流程,需要1.5个月;
2)            如果仅仅提供包装、生产服务,则需要1个月;
3)            如果不需要纯化,则相应周期减少半个月。
 
4、            如果转入的目的基因大小不同,是否会导致价格差异?

1) 基因长度在4000bp以下价格一致;
2) 基因长度大于4000bp则每增加1000bp需加收1000元;
3) 如果基因内部含有特殊的酶切位点,则需要一定的分子生物学操作,需加价1000元。
5、            腺病毒产品的运输及保存条件如何?
佰而林拥有先进的腺病毒保存技术,一般根据客户要求,提供2-4支细胞冻存管,约1ml/管,客户可以分装之后放置于-20℃保存,也可以放置于-80℃长期保存。

图片实例
       
以携带EGFP或RFP的腺病毒感染HEK293细胞,感染后36小时,荧光显微镜下可观察到高效的报告基因表达。
详情请登入公司网站www.biolinkchina.com
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